細(xì)胞名稱:	ExpiCHO-S
細(xì)胞又名:	ExpiCHO-S細(xì)胞, ExpiCHOS細(xì)胞, 懸浮CHO細(xì)胞，懸浮CHO-S細(xì)胞
種屬來(lái)源:	倉(cāng)鼠
組織來(lái)源:	卵巢
疾病特征:	正常
細(xì)胞形態(tài):	圓形
生長(zhǎng)特性:	懸浮
培養(yǎng)基:	ExpiCHO Expression Medium 無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基（Gibco A29100）
生長(zhǎng)條件:	氣相：空氣，95%；二氧化碳，8%; 溫度：37 ℃,
傳代方法:	1：2至1：6，每周2次。
凍存條件:	90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲(chǔ)存
支原體檢測(cè):	陰性
細(xì)胞培養(yǎng)條件：	培養(yǎng)基：ExpiCHO培養(yǎng)基(Gibco A29100) 培養(yǎng)類型：懸浮培養(yǎng) 溫度范圍：37°C±5°C 震動(dòng)器速度：對(duì)于口徑19毫米的培養(yǎng)瓶，設(shè)置搖床轉(zhuǎn)速為125±5轉(zhuǎn)/分。對(duì)于具有口徑25 mm的培養(yǎng)瓶，可以設(shè)置搖床震蕩速度為120±5rpm。 培養(yǎng)箱氣體：8%二氧化碳增濕體。同時(shí)，確保在搖床中的氣體流通和交換。
細(xì)胞接種密度：	預(yù)計(jì)收獲時(shí)間是轉(zhuǎn)染后3天：接種密度是0.2 × 106 –0.3 × 106 viable cells/mL 預(yù)計(jì)收獲時(shí)間是轉(zhuǎn)染后4天：接種密度是0.1 × 106 –0.2 × 106 viable cells/mL
培養(yǎng)瓶接種體積：	125ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶：建議接種30-35ml培養(yǎng)基 250ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶：建議接種60-70ml培養(yǎng)基 500ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶：建議接種120-140ml培養(yǎng)基 125ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶：建議接種240-260ml培養(yǎng)基4
ExpiCHO-S 細(xì)胞圖片：
ExpiCHO-S細(xì)胞說(shuō)明：	在藥物開(kāi)發(fā)過(guò)程中，從293細(xì)胞替換為CHO細(xì)胞可能會(huì)花費(fèi)很多寶貴時(shí)間，并且?guī)?lái)不確定性。 現(xiàn)在有了更佳方法。 Gibco ExpiCHO表達(dá)系統(tǒng)能夠達(dá)到瞬時(shí)系統(tǒng)的*高蛋白得率。 這意味著從研究開(kāi)始，您就可以一直使用 CHO 細(xì)胞。 相較于其他瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)，ExpiCHO表達(dá)系統(tǒng)可提供出色的克級(jí)蛋白產(chǎn)量，并為您節(jié)省寶貴時(shí)間、恒溫箱空間以及塑料器皿成本。  您可只使用一個(gè)培養(yǎng)瓶，來(lái)表達(dá)其他系統(tǒng)所用20或者更多培養(yǎng)瓶表達(dá)的蛋白量。 “ExpiCHO表達(dá)系統(tǒng)簡(jiǎn)單易用，比使用 大腸桿菌表達(dá)蛋白方便許多。 系統(tǒng)的可擴(kuò)展性非常棒。 我可以同時(shí)表達(dá)30種不同的單克隆抗體（mAbs），然后選擇我喜歡的一種擴(kuò)大到克級(jí)。 ExpiCHO系統(tǒng)對(duì)我們來(lái)說(shuō)是**性的救星。”   Arjen van den Berg博士，**科學(xué)家，細(xì)胞和分子醫(yī)學(xué)，加州大學(xué)圣地亞哥分校 ExpiCOH-S細(xì)胞來(lái)源于從CHO-S中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（CHO）中篩選和分離的亞克?。?）。ExpiCHO-S細(xì)胞是懸浮表達(dá)細(xì)胞，在配套的ExpiCHO表達(dá)培養(yǎng)基中具有不成團(tuán)，不聚集，并可以生長(zhǎng)到非常高的細(xì)胞密度。與標(biāo)準(zhǔn)CHO、293和高密度Expi293F細(xì)胞相比，細(xì)胞通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染可以產(chǎn)生更高的蛋白質(zhì)產(chǎn)量。   ExpiCHO-S細(xì)胞特點(diǎn)： •ExpiCHO-S細(xì)胞可以使目的蛋白表達(dá)獲得高達(dá)3g/L的產(chǎn)量 ·允許快速、高產(chǎn)量的瞬時(shí)蛋白質(zhì)生產(chǎn)，允許實(shí)驗(yàn)室開(kāi)發(fā)蛋白質(zhì)生物治療劑在藥物開(kāi)發(fā)過(guò)程中從CHO表達(dá)的蛋白質(zhì)開(kāi)始到完成.   •能夠在ExpCHO-S表達(dá)培養(yǎng)基中的高密度懸浮生長(zhǎng) •倍增時(shí)間短，17小時(shí)的快速倍增時(shí)間 •解凍后，20代內(nèi)，ExpiCHO-S細(xì)胞都能獲得一致的瞬時(shí)表達(dá)能力 •在轉(zhuǎn)染后10天內(nèi)保持細(xì)胞的高活力和高生產(chǎn)力   ExpiCHO-S細(xì)胞通常生長(zhǎng)在加濕的二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱中的搖瓶平臺(tái)上的燒瓶中。然而，培養(yǎng)基體積可從多孔板中的1L，直到搖瓶10 L培養(yǎng)基體積，都可以。根據(jù)表達(dá)的蛋白質(zhì)和ExpiCHO-S細(xì)胞狀態(tài)，可以在轉(zhuǎn)染后5-14天進(jìn)行蛋白質(zhì)收獲。
ExpiCHO-S細(xì)胞說(shuō)明書：	ExpiCHO-S細(xì)胞說(shuō)明書 ExpiCHO-S細(xì)胞培養(yǎng)方法

ExpiCHO-S細(xì)胞特點(diǎn)和簡(jiǎn)介

ExpiCHO-S細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)方案

ExpiCHO-S細(xì)胞實(shí)驗(yàn)流程圖

ExpiCHO-S細(xì)胞蛋白表達(dá)產(chǎn)量

圖1：ExpiCHO-S細(xì)胞與其他CHO細(xì)胞蛋白表達(dá)產(chǎn)量對(duì)比。人IgG在ExpiCHO-S細(xì)胞中表達(dá)產(chǎn)量高達(dá)3g/L以上，是CHO細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)量的160倍； 促紅細(xì)胞生成素（EPO）在ExpiCHO-S細(xì)胞中表達(dá)產(chǎn)量是0.5g/L， 該產(chǎn)量是CHO細(xì)胞的25倍；兔IgG在ExpiCHO-S細(xì)胞中表達(dá)產(chǎn)量是0.4mg/L, 是CHO細(xì)胞表達(dá)水平的95倍。

與Expi293相比，在ExpiCHO-S表達(dá)系統(tǒng)中，IgG或者其他蛋白的產(chǎn)量提高了0.6-97倍。


下圖是人源抗體在Expi293與ExpiCHO-S細(xì)胞中的表達(dá)水平比較。

蛋白質(zhì)	Expi293或當(dāng)前系統(tǒng)(mg/L)	ExpiCHO (mg/L)	成倍增加
人源抗體	26.6	2,580	97
	4	147	33
	4	56	14.6
	22	266	12.4
	48	334	6.9
	36	190	5.3
	18	78	4.3
	85	314	3.7
	170	410	2.4
	138	325	2.4
	25	50	2.0
	102	204	2.0
	57	92	1.6
	336	491	1.5
	565	864	1.5
	450	600	1.3
	350	450	1.3
	309	383	1.2
	243	276	1.1
	352	371	1.1
	565	620	1.1
	309	302	1.0
	139	129	0.9
	11	9	0.8
	565	365	0.6
	檢測(cè)不到	500
	沉淀	330

下圖是兔源抗體和鼠源抗體在Expi293與ExpiCHO-S細(xì)胞中的表達(dá)水平比較。

蛋白質(zhì)	Expi293或當(dāng)前系統(tǒng)(mg/L)	ExpiCHO (mg/L)	成倍增加
兔源抗體	5	120	20
	17	178	11
鼠源抗體	216	1,412	6.5
	20	86	4.3
	60	240	4.0
	60	240	4.0
	76	196	2.6
	12	18	1.5
	16	17	1.1
	119	48	0.4
	135	47	0.3

下圖是其他抗體在Expi293與ExpiCHO-S細(xì)胞中的表達(dá)水平比較。

蛋白質(zhì)	Expi293或當(dāng)前系統(tǒng)(mg/L)	ExpiCHO (mg/L)	成倍增加
鉍碲	免疫印跡	免疫印跡	25
雙特異性抗體	28	117	4.2
	26	90	3.5
	126	250	2.0
	NA	763
	NA	660
分泌	216	1412	6.5

下圖是非抗體蛋白在Expi293與ExpiCHO-S細(xì)胞中的表達(dá)水平比較。

蛋白質(zhì)	Expi293或當(dāng)前系統(tǒng)(mg/L)	ExpiCHO (mg/L)	成倍增加
非抗體	15	82	5.5
	免疫印跡	免疫印跡	5.0
	164	68	0.4
	NA	206
Fab	85	366	4.3
	10	10	1.0
FC融合蛋白	5	8	1.7
His標(biāo)簽的人白細(xì)胞抗原	檢測(cè)不到	12	12
病毒蛋白	免疫印跡	免疫印跡	3–5
細(xì)胞因子	免疫印跡	免疫印跡	5-10
FcR	免疫印跡	免疫印跡	2-3

ExpiCHO-S懸浮CHO-S細(xì)胞接受后處理

1) 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液 ，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。

 2) 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng) 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

 3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

 4) 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請(qǐng)及 時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

 5) 接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是 否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。
 

ExpiCHO-S懸浮CHO-S細(xì)胞培養(yǎng)操作

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。**天換液并 檢查細(xì)胞密度。

 2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
   
     1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
   
     3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

     4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

    1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

    3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

ExpiCHO-S懸浮CHO-S細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

 1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請(qǐng)及 時(shí)和我們聯(lián)系。
 
 2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細(xì)胞因子 等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn) 題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

 3.   用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量 從瓶 壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時(shí),再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均 會(huì)貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán) 染色測(cè)定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常， 請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無(wú)活 力，請(qǐng)拍下 照片及時(shí)和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。

 4.   靜置細(xì)胞貼壁后，請(qǐng)將細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng)，待細(xì) 胞匯 合度  80%左右時(shí)正常傳代。

 5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞 傳代時(shí)可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

 6.   建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和 Procell 技術(shù) 部 溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián) 系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

 7.該細(xì)胞僅供科研使用。

125ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶：建議接種30-35ml培養(yǎng)基