免疫組化顯示波形蛋白(Vimentin)抗體陰性；結蛋白(Desmin)抗體陽性。

1、細胞培養(yǎng)條件是26°C–28°C，空氣中即可，不用二氧化碳。在培養(yǎng)皿中是半貼壁細胞，在搖瓶中是懸浮細胞。

2、S2果蠅細胞的完全培養(yǎng)基是：
      Schneider's  Drosophila medium + 10% 熱滅活胎牛血清+ 0.1% Pluronic F-68. 這個完全細胞培養(yǎng)基在瞬時表達和穩(wěn)表達細胞系構建的時候，都可以使用。
      Pluronic F-68在懸浮培養(yǎng)的時候需要加入，但是在貼壁培養(yǎng)的時候不用添加。
      可以選擇性的加入終濃度為50 單位/ml的青霉素和50 ug/ml的鏈霉素。
      細胞轉染和凍存的時候，需要確保細胞的活力大于95%.

3、S2果蠅細胞培養(yǎng)時倍增的時間是24小時，細胞進行傳代的時候*好是在細胞對數(shù)生長期。

4、S2果蠅胚胎細胞的凍存條件是： 45% 用過的完全培養(yǎng)基（條件培養(yǎng)基）+45% 新鮮完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲存。 用過的完全培養(yǎng)基（條件培養(yǎng)基）中含有S2果蠅細胞的生長因子，有助于S2細胞的生長，所以一定要保留一點用過的培養(yǎng)基在里面。

5、培養(yǎng)S2細胞的時候，如果使用未滅活的胎牛血清，會抑制S2細胞的生長。

6、果蠅Schneider 2（s2）細胞可以轉染表達載體用于蛋白瞬時表達或共轉染一個篩選載體（例如pcohygro或pcoblast）構建穩(wěn)表達細胞系。我們建議你測試一下你的蛋白的瞬時表達情況，然后再構建穩(wěn)表達細胞系。一旦你證明你的蛋白質在s2細胞中表達，你可以構建穩(wěn)表達細胞株，增加蛋白表達，擴大蛋白表達的生產規(guī)模。果蠅S2穩(wěn)表達細胞系通常包含多拷貝基因插入，形成500多個-1000個拷貝數(shù)，首尾相接，插入的基因拷貝數(shù)可以通過改變表達質粒和選擇質粒的比例來控制。我們建議使用表達質粒與選擇質粒比例是的19:1（w/w）。你可以改變比率以優(yōu)化特定基因的表達。質粒轉染建議使用磷酸鈣，但一些脂基轉染試劑，例如Lipo2000轉染試劑同樣適用。

7、果蠅表達系統(tǒng)的篩選載體是pCoHygro載體和pCoBlast載體，他們分別含有潮霉素（Hygromycin）和殺稻瘟菌素（Blasticidin）篩選抗性。在這兩個載體中，抗性基因都是在Copia啟動子的作用下調控的。

8、構建穩(wěn)表達細胞系時，使用pCoHygro篩選質粒和表達質粒一起共轉染S2果蠅細胞的時候，潮霉素的篩選濃度是300ug/ml, 一般要篩選3-4個星期。使用使用pCoBlast篩選質粒和表達質粒一起共轉染S2果蠅細胞構建穩(wěn)表達細胞系的時候，殺稻瘟菌素的篩選濃度是25 ug/ml, 一般要篩選2個星期就可以了。在篩選過程中，細胞死亡會經(jīng)常發(fā)生。      


Gibco果蠅s2細胞用于果蠅表達系統(tǒng)（DrosophilaM Expression System， DES）中異源蛋白的表達。S2細胞系來源于黑腹果蠅（Drosophila melanogaster）胚胎后期細胞（20-24小時）的原代培養(yǎng)。s2細胞系的許多特征表明它來源于巨噬細胞樣細胞系。s2細胞在室溫下二氧化碳濃度條件下就可以生長，在培養(yǎng)皿中呈松散的半粘附單層，在搖瓶中呈懸浮細胞狀態(tài)。

果蠅S2細胞特征如下：

 

•可以用于蛋白質的瞬時表達或用于構建穩(wěn)定表達的細胞系。

 

•用于蛋白表達的質量和性能測試，用于質控。

 

 

1、用于蛋白質的瞬時表達或構建穩(wěn)表達細胞系

 

果蠅s2細胞可單獨用重組表達載體進行瞬時表達研究，或使用載體（如pcohygro或pcoblast）以構建穩(wěn)表達細胞系。有多種果蠅表達系統(tǒng)試劑盒可用于在S2細胞中表達感興趣的重組蛋白。

 

2、細胞株質控標準

 

每批S2細胞都經(jīng)過冷凍后細胞生長和活力測試。此外，還對S2細胞株進行了細菌、酵母菌、支原體和病毒污染檢測，并對其進行了同工酶和核型分析。