出品公司:	ATCC
細(xì)胞名稱:	THLE-3細(xì)胞, ATCC CRL-11233細(xì)胞, THLE3細(xì)胞, 人肝永生化細(xì)胞
細(xì)胞又名:	Transformed Human Liver Epithelial-3
存儲(chǔ)人:	National Cancer Institute
種屬來源:	人
組織來源:	肝臟
疾病特征:	正常
細(xì)胞形態(tài):	上皮細(xì)胞樣
生長特性:	貼壁生長
培養(yǎng)基:	MEM培養(yǎng)基(MEM，GIBCO，貨號41500034)，90%；FBS，10%。
產(chǎn)品目錄號:	CRL-11233
生長條件:	氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37 ℃,
傳代方法:	1：2至1：6，每周2次。
凍存條件:	90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲(chǔ)存
支原體檢測:	陰性
**等級:	2
STR:	Amelogenin: X CSF1PO: 11,12 D13S317: 13 D16S539: 11,12 D5S818: 13 D7S820: 8,10 THO1: 8,9.3 TPOX: 6,9 vWA: 17,18
參考文獻(xiàn):	Harris CC, et al. Human liver epithelial cells. US Patent 5,759,765 dated Jun 2 1998   Pfeifer AM, et al. Simian virus 40 large tumor antigen-immortalized normal human liver epithelial cells express hepatocyte characteristics and metabolize chemical carcinogens. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5123-5127, 1993. PubMed: 7685115   Pfeifer AM, et al. Simian virus 40 large tumor antigen-immortalized normal human liver epithelial cells express hepatocyte characteristics and metabolize chemical carcinogens. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5123-5127, 1993. PubMed: 7685115
細(xì)胞圖片：

THLE-3細(xì)胞ATCC CRL-11233人肝永生化細(xì)胞特點(diǎn)和簡介

THLE-2 (ATCC CRL-10149 和 THLE-3 (ATCC CRL-11233)細(xì)胞系是正常肝細(xì)胞用SV40大T抗原轉(zhuǎn)染得到。 將含有SV40 T抗原的Bgl I-Hpa I片段的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入兼嗜性包裝細(xì)胞株P(guān)A317中生產(chǎn)病毒。 THLE-2 and THLE-3表達(dá)正常**肝上皮細(xì)胞特征性的表型。 當(dāng)注射到無胸腺裸鼠中時(shí)，它們不成瘤，具有接近二倍體的核型，不表達(dá)甲胎蛋白。 THLE-2 and THLE-3將benzo[a]pyrene, N-nitrosodimethylamine, 和 aflatoxin B1代謝成附著于DNA的*終成瘤代謝物，從而揭示細(xì)胞色素P450途徑的發(fā)揮作用。 THLE也保留了其他與化學(xué)致瘤物代謝相關(guān)的酶，比如epoxide hydrolase, NADPH cytochrome P450 reductase, superoxide dismutase, catalase, glutathione S-transferases, and glutathione peroxidase 這些永生化人肝細(xì)胞構(gòu)成了研究藥物毒理學(xué)和人肝細(xì)胞癌的病原學(xué)及病理的體外模型。 1993年一月提交到ATCC的培養(yǎng)物污染了支原體。 其后代用去支原體試劑進(jìn)行處理21天。 處理后六周，用Hoechst染色、PCR和標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)測試進(jìn)行支原體檢測。 結(jié)果都呈陰性。

THLE-3細(xì)胞ATCC CRL-11233人肝永生化細(xì)胞接受后處理

1) 收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。

 2) 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

 3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

 4) 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請及 時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

 5) 接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是 否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。
 

THLE-3細(xì)胞ATCC CRL-11233人肝永生化細(xì)胞培養(yǎng)操作

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。**天換液并 檢查細(xì)胞密度。

 2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
   
     1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
   
     3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

     4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

    1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

    3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

THLE-3細(xì)胞ATCC CRL-11233人肝永生化細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

 1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時(shí)和我們聯(lián)系。
 
 2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細(xì)胞因子 等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問 題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

 3.   用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量 從瓶 壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時(shí),再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均 會(huì)貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺(tái)盼藍(lán) 染色測定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常， 請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活 力，請拍下 照片及時(shí)和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。

 4.   靜置細(xì)胞貼壁后，請將細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng)，待細(xì) 胞匯 合度  80%左右時(shí)正常傳代。

 5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞 傳代時(shí)可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

 6.   建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和 Procell 技術(shù) 部 溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián) 系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

 7.該細(xì)胞僅供科研使用。